高春花和丁丹并列为第一作者,汪俊云作为通讯作者,于2015年7月在《Parasites & Vectors》杂志发表了题为“Development of a LAMP assay for detection of Leishmania infantum infection in dogs using conjunctival swab samples”的论文。该文基于我国婴儿利什曼原虫四川汶川株动基体小环 DNA 序列设计引物,成功建立了以犬眼结膜组织为检测样本的检测我国犬婴儿利什曼原虫感染的环介导等温扩增技术(LAMP)检测方法,在实验室对建立的方法的灵敏度和特异度进行了评价,并与常规 PCR 方法进行了比较,结果显示 LAMP 法检出限为 1fg 婴儿利什曼原虫DNA,高于传统 PCR法(检出限为 0.1fg 婴儿利什曼原虫DNA)。建立的LAMP 法还可有效区分虫种甚至虫株,表明 LAMP 法可特异敏感地检测婴儿利什曼原虫感染。应用建立的 LAMP 法、PCR 法、ELISA法和镜检法检测内脏利什曼病流行区犬样本,阳性率分别为 61.3 %, 58.6 %, 40.5 %和10.8 %。LAMP 法PCR 法的阳性检出率均高于ELISA法和镜检法,而二者之间的阳性检出率无统计学差异(χ2 = 0.169, p = 0.6810)。应用 PCR法 和 LAMP法 分别检测33例内脏利什曼病非流行区犬样本,各出现 1 例假阳性,特异性均为97%。以上结果表明,建立的LAMP 法PCR 法检测的敏感性和特异性相当,但LAMP 法采用犬眼结膜拭子法取样,为非侵害性,操作简便、易为犬主人接受。因此,本研究建立的基于犬眼结膜拭子样本 LAMP 法检测犬利什曼原虫感染是一种快速、简便、敏感、特异,适合现场使用的检测方法,尤其适用于动物源型内脏利什曼病流行区无症状感染犬的检测。
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