One-Pot RPA-CRISPRCas12a assay for Rapid Visual Detection of Giardia duodenalis in Cattle and Goats

十二指肠贾第鞭毛虫（Giardia duodenalis）是一种广泛存在的人畜共患原虫，可引起人类和家畜的贾第虫病。为快速直观检测十二指肠贾第鞭毛虫，我们开发了一种一步法RPA-CRISPR/Cas12a检测方法，用于检测特定的基因组片段（GenBank：CP110919.1）。为此，我们设计并优化了crRNA和RPA引物。该检测方法在37°C下，仅需30分钟即可在单个试管内完成检测，且具有高度特异性，对六种非靶标病原体无交叉反应。对于重组质粒，检测限为1个拷贝/μL；对于包囊，检测限为每10mL 1个包囊，优于巢式PCR（103个包囊/10mL）。在30份临床粪便样本中，该检测方法与巢式PCR的一致性达到100%。这种一步法反应体系消除了气溶胶污染的风险，并可提供直观的可视化读取，为牛和山羊贾第虫病的筛查提供了一种现场适用的工具。

中国CDC寄生虫病所洪炀研究员为本文并列通讯作者。该文发表于2026年9月发表于Pakistan Veterinary Journal上。