在光学显微镜（油镜）下所见的利什曼原虫无鞭毛体呈园形，平均大小为4.4μm×2.8μm。 吉姆萨或瑞氏染色后，原虫的细胞浆呈淡蓝色；核的位置常靠近细胞膜，染成红色；动基体呈杆状，位于核的对侧，呈紫红色；有时在动基体附近可见小的空泡。三恩培养基内或白蛉消化道内的前鞭毛体呈梭型，染色后胞浆呈淡兰色，深红色的核一般位于虫体中部，动基体位于核的前端，呈紫红色，基体位于虫体最前端，呈红色颗粒状，鞭毛由此发出并伸向体外,作为运动的工具。

   诊断方法

病原学检查

1．髂骨穿刺：施行髂骨穿刺时，病人侧卧。术者先用手指确定髂骨前上棘的部位，皮肤消毒。视患者年龄大小使用17号至20号的干燥无菌穿刺针，从髂骨前上棘后1cm处刺入皮肤，然后将针竖起，使与水平线呈70－80度，穿过皮下组织及骨膜后，施术者可感觉到针头已触及骨面，再用旋转式的动作将针头钻入骨腔，穿刺深度为0.5－1cm，针头刺入骨腔后，可将针芯抽出，接以5毫升干燥无菌注射器，抽取少许骨髓，制成涂片，染色后镜检。此法的利什曼原虫检出率约在85％左右。合并HIV感染的黑热病患者,检出率可达98％。

2．脾脏穿刺：实施脾穿刺前，应先测定病人的出血时间，如超过5分钟则不予穿刺，凡脾肿在肋下4cm 以内的亦以不作穿刺为妥，患者如伴有腹水、黄疸、极度贫血以及并发肺炎等严重疾病时，均不宜施行脾穿刺术。穿刺时病人仰卧，施术者先确定脾脏的大小和部位，消毒皮肤。助手托住肿大的脾脏下端，以固定其位置。术者持干燥消毒的带有22－24号针头的2毫升注射器，从脾脏正中离肋缘下约2cm 处刺入皮下，即将针筒的轴抽出一段，使注射器先形成真空，再刺入脾内，即可吸出脾髓，针头拔出后，即将针头内的脾髓注射于玻片上，制成涂片，染色镜检。脾穿刺法的原虫检出率很高，可达95％左右。

3．淋巴结穿刺：肿大的淋巴结处的皮肤作局部消毒后，用洗净的左手拇指和食指捏住淋巴结，向上提起，并使其固定于两指之间。手持消毒的针头刺入淋巴结内，待数秒钟后即将针头拔出。因淋巴结内的压力较高，淋巴液会自动流入针内，无需用针筒抽吸。针头拔出后，用空针筒接上，将针筒内淋巴液射在玻片上，制成涂片，染色镜检。该法对初诊病人而言，原虫的检出率一般为50％左右，但合并HIV感染的黑热病患者，检出率可达100％。

4．皮肤刮片检查：局部皮肤消毒后，以洗净的左手拇指和食指捏住皮肤结节，使其固定于两指间。再用灭菌干燥手术刀轻轻切开皮肤，刮取切口两侧的皮肤组织，制成涂片后染色镜检。如是PKDL，一般都能查见利什曼原虫。

5．原虫培养：在严格的无菌操作下，把可疑病人的骨, 脾、淋巴结或皮肤损害内所取得的各种组织液置三恩培养基内，放入22－24⁰C温箱内培养。15天后用白金耳取少量培养液于玻片上，在光学显微镜（高倍）下检查，如查见利什曼原虫前鞭毛体，即可确定诊断。

附：三恩培养基(Novy-Mc Neal-Nicolle medium)的制备：琼脂14.0 克，录化钠6.0克，蒸馏水900毫升，盛烧瓶中加热使琼脂完全融化于水内，分装试管，每管3毫升，以棉塞塞紧管口，经高压灭菌，待稍冷却后每管加入1毫升去纤维兔血，均匀混合后斜置于冰水中冷却，待琼脂凝固后每管内加入0.5毫升洛克液，管口换上消毒的橡皮塞，4⁰C冷藏备用。

血清学检查

自70年代开始，随着生物化学、免疫学和分子生物学的进展，促使血清学诊断研究有了很大提高。不仅方法多样，而且从以往简单的补体结合试验，发展为微量、特异、快速的免疫标记技术。这种黑热病免疫诊断新技术可用于检测感染宿主体内的循环抗体、循环抗原和循环免疫复合物。在辅助病原诊断及判断流行情况方面起着重要的作用。目前主要应用的为抗体检测和抗原检测两大类，其中检测抗体的技术有以下3种。

1.免疫荧光测定(IFAT)：为免疫荧光染色示踪抗原或抗体的方法，即用化学方法将荧光素与特异性抗体或抗人免疫球蛋白结合，制备成荧光抗体。再与相应的抗原或抗体－抗原复合物相结合时，形成免疫荧光复合物。此时可用荧光显微镜观察，如待测样本呈亮绿色荧光，则显示阳性，证明有相应的抗体存在。黑热病IFAT试验的阳性率为100％，抗体滴度最低为1:320，最高为1:5120，与健康人及其它疾病的交叉反应，抗体滴度不超过1:20。此法的另一优点在于可采血20mm³滴于滤纸上，浸出液亦可进行IFAT，便于黑热病基本消灭地区的监测工作。根据山东省寄生虫病防治研究所的随访观察，在黑热病治愈已1－7年的7例中，IFAT无一例转阴，抗体滴度为1:160－1:2560，在治愈已经

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